一、分離方法會(huì)影響胰島的產(chǎn)率和存活率:
因此,取材時(shí)需要注意
1.胰臟應(yīng)快速取材,保持包膜完整。
2.建議采用UW溶液運(yùn)輸。
3.對(duì)胰臟進(jìn)行評(píng)估,在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
4.消化過(guò)程不宜進(jìn)行震蕩,以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化,而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
5.要保證胰島的包膜完整,消化不能太充分。寧可不足,也不可過(guò)頭,否則會(huì)影響胰島純化的產(chǎn)率。
二、分離胰島細(xì)胞時(shí)的注意事項(xiàng):
1. biocoll分離液使用時(shí),是采用連續(xù)密度梯度,需要分別配制密度為1.065g/mL(UW溶液與Biocoll混合)和密度為1.095 g/mL(UW溶液與Biocoll混合)的溶液,二者再混合。
2. 分離時(shí)離心1800rpm,可考慮離心10分鐘,之后使COBE細(xì)胞分離機(jī)保持4℃,防止酶激活導(dǎo)致結(jié)構(gòu)完整性破壞。
3. 胰島在最輕密度層,隨著密度增加,也會(huì)有部分胰島,但外分泌組織也會(huì)增多。